Născut în Brooklyn, New York, Guardino a apărut pe scenă, în filme și la televizor. Creditele sale pe Broadway includ A Hatful of Rain, One More River (pentru care a primit o nominalizare la premiul Tony pentru Cel mai bun actor în rol secundar într-o piesă), Anyone Can Whistle, The Rose Tattoo, The Seven Descents of Myrtle și Woman of the Year.
Alte filme în care a jucat Guardino includ Houseboat, Pork Chop Hill (despre războiul coreean), The Five Pennies, King of Kings, Madigan, Lovers and Other Strangers și Dirty Harry. A fost nominalizat de două ori la premiul Golden Globe pentru Cel mai bun actor în rol secundar. A avut roluri episodice în seria lui John Cassavetes din 1959-1960, Johnny Staccato, povestea unui pianist/detectiv privat din New York.
În 1960, Guardino a apărut ca Johnny Caldwell în episoadele "Perilous Passage", "The O'Mara's Ladies" și "Daughter of the Sioux" în seria western NBC Overland Trail, cu William Bendix și Doug McClure. McClure, doi ani mai târziu, avea să se alăture seriei de lungă durată The Virginian pe NBC, după o perioadă anterioară în seria de detectivi CBS Checkmate.
Guardino a avut un rol continuu ca nemesisul lui Perry Mason, Hamilton Burger, în seria de televiziune din 1973 The New Perry Mason și un rol recurent în Murder, She Wrote cu Angela Lansbury. A avut apariții episodice în zeci de serii de televiziune, inclusiv Studio One, Target: The Corruptors!, The Eleventh Hour, Alfred Hitchcock Presents, Kraft Television Theatre, Playhouse 90, Dr. Kildare, The Lloyd Bridges Show, Route 66, Ben Casey, Hawaii Five-O, Love, American Style, The Greatest Show on Earth, Kojak, The Streets of San Francisco, Jake and the Fatman și Cheers. A avut rolul principal al detectivului Lee Gordon în filmul de suspans pentru televiziune din 1969 The Lonely Profession.
Guardino